腺相關(guān)病毒 (AAV) 是基因治療中最廣泛使用的傳遞/遞轉機制。近年來(lái)，基于A(yíng)AV病毒所開(kāi)發(fā)的基因療法研發(fā)及臨床試驗注冊數量也呈指數級增長(cháng)，也需要AAV病毒生產(chǎn)工藝及產(chǎn)能的不斷優(yōu)化及擴展，從最早基于貼壁細胞工藝升級轉換到以懸浮為主的200-2000L反應體系。

Mirus Bio成立于1996年，在核酸遞送領(lǐng)域深耕多年，于2021年8月推出GMP級別TransIT-VirusGEN® GMP 轉染試劑，支持AAV及LV從科研到GMP商業(yè)化生產(chǎn)。不同于傳統基于單組分的轉染試劑(如陽(yáng)離子聚合物聚乙烯亞胺，PEI)，Mirus Bio將專(zhuān)利的多聚物及脂質(zhì)技術(shù)進(jìn)行多重組合，形成多功能性的轉染方案，克服細胞遞轉過(guò)程中的多重阻礙，以實(shí)現更高效轉染和更低細胞毒性，從而大幅度提升多種血清型AAV病毒生產(chǎn)載量。去年7月底Mirus上市RevIT? AAV Enhancer，已證明在不同AAV血清型別中，可提高AAV病毒基因組滴度1.2-4.9倍，并且在一定程度改善了實(shí)心率。更重要的是，RevIT? AAV Enhancer不僅可以搭配Mirus TransIT-VirusGEN® GMP 轉染試劑，也適配于其他轉染試(如PEI等)，使得AAV生產(chǎn)上游成本的進(jìn)一步降低成為可能，進(jìn)而降低了基因治療單劑量成本。下圖展示了國內客戶(hù)前期測試反饋結果，測試包括了不同血清型別的質(zhì)粒設計，適用于國內及國外品牌的轉染試劑、細胞及培養基體系，實(shí)現了1.5-4倍以上的AAV病毒滴度提升。

RevIT Enhancer在國內客戶(hù)不同AAV項目平臺上的測試反饋結果

隨著(zhù)國內外客戶(hù)項目及管線(xiàn)推進(jìn)，已有越來(lái)越多的客戶(hù)將TransIT-VirusGEN® 轉染試劑以及RevIT? AAV Enhancer從搖瓶階段線(xiàn)性放大至200L-500L反應器，并且已應用到處于臨床申報產(chǎn)品中。ReciBioPharm 與Mirus Bio合作， Chris Brown(工藝流程開(kāi)發(fā)部門(mén))在線(xiàn)上(鏈接)展示了TransIT-VirusGEN 和RevIT? AAV Enhancer數據結果，并且比較了所有測試規模(搖瓶&反應器)，反饋病毒滴度放大效果非常好，并且實(shí)心率也保持相同水平，在 50 升的生物反應器中，也有著(zhù)40%以上實(shí)心率。Chris Brown表示“選擇用TransIT-VirusGEN 和RevIT? AAV Enhancer產(chǎn)品，是基于我們以往的測試數據，允許最大限度地提高 AAV 產(chǎn)量。產(chǎn)量的提高，單個(gè)50 升生物反應器可生產(chǎn)更多劑量，從而降低單位劑量的成本。”

更多的，Bridgebio在poster中分享了基于AAV5型別，使用TransIT-VirusGEN® 轉染試劑以及RevIT? AAV Enhancer從搖瓶線(xiàn)性放大至200L反應體系(125mL搖瓶→2L → 10L → 200L)，病毒滴度和實(shí)心率數據結果(圖1)。與原有工藝相比 (Process A：PEIPro轉染 + Expi293細胞/培養基)，替換成TransIT-VirusGEN® 轉染試劑后的工藝流程 (Process B：TransIT-VirusGEN® 轉染試劑 + Expi293細胞 + BalanCD培養基；Process C：TransIT-VirusGEN® 轉染試劑 + VP2.0細胞 + BalanCD培養基)均有著(zhù)更高的病毒滴度(圖2)和更低的宿主DNA和質(zhì)粒DNA殘留。

圖1. 從125mL搖瓶線(xiàn)性放大至200L反應體系的病毒滴度和實(shí)心率數據結果

圖2. 采用Mirus的工藝平臺均有著(zhù)更高的病毒滴度

Mirus Bio 并沒(méi)有止步于此，并于2024年10月7日重磅推出 TransIT®-AAViator AAV轉染試劑。繼續沿用Mirus Bio 多聚物及脂質(zhì)兩組分的經(jīng)典組合，不同的是應用逆向工程思維，基于現有RevIT? AAV Enhancer，從Mirus Bio多聚物及脂質(zhì)庫中，分別篩選出更優(yōu)化的脂質(zhì)和聚合物配方。新推出的TransIT®-AAViator轉染體系，進(jìn)一步降低了 AAV工藝生產(chǎn)流程中所需質(zhì)粒 DNA 和轉染試劑使用量，最大限度地提高不同AAV血清型滴度和實(shí)心率，從而提升 AAV生產(chǎn)工藝的總體生產(chǎn)效率。整合TransIT®-AAViator的AAV病毒上游生產(chǎn)工藝，無(wú)需通過(guò)細胞密度而調整試劑和質(zhì)粒DNA加入量，并且實(shí)現了單個(gè)生物反應器的生產(chǎn)劑量的成倍增加，大幅度降低了單位劑量的成本，為基于AAV 病毒的基因治療開(kāi)發(fā)提供了更優(yōu)的解決方案。

產(chǎn)品詳情

• 產(chǎn)品名稱(chēng): TransIT®-AAViator Transfection System
• 上市日期：2024年10月7日
• 產(chǎn)品貨號: MIR 73750 / MIR 73745
• 產(chǎn)品組分：TransIT®-AAViator轉染試劑及RevIT? AAV增強子

Mirus Bio AAV病毒生產(chǎn)相關(guān)轉染試劑產(chǎn)品參數

* HDPE材質(zhì)管/瓶

*只針對30 mL以及150 mL 規格試劑

**只針對150 mL 規格試劑

TransIT-AAViator®提升AAV生產(chǎn)效率&降低單劑量成本

生產(chǎn)劑量的成倍增加

隨著(zhù)AAV病毒滴度的提升，單個(gè)反應器所允許生產(chǎn)劑量也成倍的增加，從而大幅度降低單劑量成本。

減少生產(chǎn)所需批次

提高AAV病毒生產(chǎn)總產(chǎn)量，減少每次生產(chǎn)的所需批次數量或擴大生物反應器規模才可滿(mǎn)足生產(chǎn)需求，緩解了由于產(chǎn)能不足等諸多限制。

減少質(zhì)粒DNA用量

TransIT®-AAViator 轉染系統，降低了至少一半質(zhì)粒 DNA使用量 ，同時(shí)仍可保持高水平的滴度和實(shí)心率，進(jìn)一步降低了批次生產(chǎn)成本。

加快工藝開(kāi)發(fā)進(jìn)程

TransIT®-AAViator 轉染系統，只需較少實(shí)驗優(yōu)化，即可獲得最佳結果，從而縮短了工藝開(kāi)發(fā)時(shí)間，加快了產(chǎn)品上市速度。

TransIT®-AAViator有著(zhù)更高滴度和實(shí)心率

使用不同的質(zhì)粒設計(GFP基因-圖3；RPE65 基因-圖4)，平行比較TransIT®-AAViator 轉染系統與“Poly F”(Polyplus FectoVIR® 病毒轉染試劑)以及“Poly P” (Polyplus PEIpro®病毒轉染試劑)。實(shí)驗結果顯示，在不同AAV血清型別中 (AAV5、8、9)，TransIT®-AAViator 轉染系統有著(zhù)更高的病毒滴度及實(shí)心率，當質(zhì)粒設設計替換成治療性基因(RPE65 基因)，病毒滴度及實(shí)心率相比于競爭品牌，其優(yōu)勢更加顯著(zhù)。

圖3. 轉染GFP基因質(zhì)粒的AAV滴度

圖4. 轉染RPE65基因質(zhì)粒的AAV滴度

TransIT®-AAViator降低質(zhì)粒DNA用量

TransIT®-AAViator轉染系統，在較低質(zhì)粒 DNA 用量仍可得到高水平AAV病毒滴度及實(shí)心率（圖5）。

圖5. 實(shí)驗使用TransIT® -AAViator轉染試劑(試劑:DNA比例為1.25:1,vol:wt)，以 1:1:1 的質(zhì)粒質(zhì)量比轉染 pAAV-WPRE-GFP (Aldevron), pAAV-Helper (Aldevron) 和 pAAV-RepCap (AAV9 Genemedi)三質(zhì)粒。轉染時(shí)加入RevIT AAV Enhancer（1 μl/mL），轉染后 72 小時(shí)使用化學(xué)裂解法收獲 AAV病毒。

TransIT-AAViator實(shí)驗流程

Step 1:  轉染前，需保證生長(cháng)在培養基中的懸浮 HEK 293 細胞活率 > 95%。

Step 2: 轉染時(shí)：建議細胞密度為 ~ 3 × 10E6 cells/mL，TransIT®- AAViator 試劑與DNA 加入比例為1:1 - 1.5:1，每 1 mL 培養基加入RevIT AAV Enhancer 0.5 - 1.5 μl；靜止條件下孵育15-45 分鐘，以便形成轉染復合物，然后輕柔的加入細胞中。

Step 3: 轉染后無(wú)需更換培養基，一般可在轉染后 48-72 小時(shí)收獲AAV病毒。

客戶(hù)案例分享

最新線(xiàn)上webinar：Enhancing AAV Production: A Novel Transfection System for Cell and Gene Therapy Applications (鏈接)

演講者信息：

Webinar內容一覽：

通過(guò)該線(xiàn)上Webinar，可了解TransIT®-AAViator 轉染系統，包括了開(kāi)發(fā)初衷、數據性能對比及展示等。來(lái)自Affinia Therapeutics 高級工藝開(kāi)發(fā) Michael White， 強調了該轉染系統的可擴展性和工作流程的易整合性，是想要優(yōu)化上游工藝和增加整體成本效益的理想選擇。

此外，Michael White分享了 Affinia Therapeutics AAV轉染平臺體系納入TransIT®-AAViator 轉染系統經(jīng)驗，強調該系統能夠降低質(zhì)粒DNA用量，同時(shí)也在不同規模中進(jìn)行了測試(搖瓶-3L反應器)，可穩定的保持高水平滴度，從而大幅度提高了生產(chǎn)工藝的效率，同時(shí)降低了AAV病毒生產(chǎn)成本。

討論重點(diǎn)包括：

• Affinia 比較了新一代轉染系統TransIT®-AAViator與當前使用的平臺工藝；
• Affinia 在將TransIT-AAViator® 與其他試劑性能進(jìn)行比較中，如何優(yōu)化使其性能顯著(zhù)優(yōu)于其他轉染試劑；
• 整合TransIT®-AAViator轉染系統，相比于優(yōu)化前實(shí)現了3 倍滴度提升及 70% 實(shí)心率。

小結

新一代專(zhuān)為優(yōu)化AAV 生產(chǎn)工藝而推出的轉染試劑: TransIT®-AAViator 轉染系統：

• 與基于單個(gè)組分(如PEI)轉染試劑不同，可顯著(zhù)的提高不同AAV 血清型別的滴度及實(shí)心率；
• 有著(zhù)更低轉染試劑及質(zhì)粒DNA使用量需求，同時(shí)保持高水平的AAV滴度及實(shí)心率；
• 相比于競爭品牌(FectoVIR&PEIpro等)，有著(zhù)更高基因組滴度及實(shí)心率，并且質(zhì)粒設計為治療基因，其優(yōu)勢更加顯著(zhù)。

相關(guān)產(chǎn)品信息及鏈接

Mirus成立于1995年，始終秉承著(zhù)為基因遞轉提供優(yōu)化方法及高效的工具。憑借超過(guò) 25 年轉染領(lǐng)域的深根細作，獲得了多項技術(shù)突破，已成為核酸遞送領(lǐng)域的全球領(lǐng)導者和值得信賴(lài)的品牌。Mirus科學(xué)家團隊不斷突破轉染技術(shù)的極限，推出了VirusGEN®轉染試劑與RevIT?增強劑，進(jìn)一步提升AAV/LV產(chǎn)量，助力推動(dòng)生物治療藥物的降本增效，為CGT領(lǐng)域客戶(hù)賦能。

北京西美杰科技有限公司是Mirus中國區代理，始終秉承著(zhù)專(zhuān)業(yè)、嚴謹的態(tài)度為客戶(hù)提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。如果您對上述產(chǎn)品感興趣，歡迎致電北京西美杰客服熱線(xiàn)400-050-4006或登錄網(wǎng)站www.5mmmmm.com了解更多產(chǎn)品信息。