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二抗是在其他宿主體內制備的能與一抗或一抗片段結合的抗體，上面通常連有酶或熒光素等標記物。二抗針對某一特定物種的所有抗體均具有特異性，因而使用標記的二抗可以免去對每一個(gè)一抗進(jìn)行標記，大大節省了時(shí)間和費用。
檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，同時(shí)在后繼實(shí)驗中也會(huì )有不同的檢測方案，如ELISA、WB、IHC、IF、IP、Flo等，因此在選擇二抗的時(shí)候要綜合考慮一抗的類(lèi)型及后繼檢測方案的要求，一般來(lái)說(shuō)，選擇合適的二抗需要從下面幾個(gè)方面考慮：
一抗的種屬來(lái)源：
二抗應根據一抗的物種來(lái)源選擇相應的抗該物種的二抗，例如：如果一抗是小鼠源的單克隆抗體，二抗則選抗小鼠的二抗。
一抗的類(lèi)別與亞型：
二抗需與一抗的類(lèi)別或亞類(lèi)相匹配，通常是針對單克隆抗體而言。如果單克隆一抗是小鼠IgG的某一亞類(lèi)，那么幾乎所有的抗小鼠IgG都可以與之結合，在不清楚一抗為何種類(lèi)/亞類(lèi)的情況下，可以選用抗相應物種IgG,或者你也可以選擇專(zhuān)門(mén)針對這一亞類(lèi)的二抗。
二抗的種屬來(lái)源：
二抗的種屬來(lái)源與其質(zhì)量沒(méi)有必然的聯(lián)系，不同來(lái)源的二抗在一般的實(shí)驗里沒(méi)有太多的差別。然而在一些特殊的實(shí)驗里，如雙標實(shí)驗里，如果兩個(gè)一抗一個(gè)山羊來(lái)源，一個(gè)小鼠來(lái)源，則相應的二抗分別要抗山羊和抗小鼠的二抗，這時(shí)候，二抗就不能選擇山羊或者小鼠來(lái)源的。
二抗的耦聯(lián)標記：
耦聯(lián)到二抗上的標記主要有酶（辣根過(guò)氧化酶HRP和堿性磷酸酶AP或其衍生物APAAP，PAP），熒光基團（FITC、PE、Dylight等），生物素，金顆粒。選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實(shí)驗。對于WesternBlot和ELISA，常用的二抗是酶標二抗；而細胞或組織標記實(shí)驗（細胞免疫化學(xué)、組織免疫化學(xué)、流式細胞術(shù)）中常用熒光基團標記的二抗；免疫組化中也可以使用HRP或AP標記的二抗。
二抗的純度：
親和層析純化相對于傳統的血清純化、鹽沉淀等方法更加高效，得到的抗體純度較高，產(chǎn)生的非特異性背景少，所以親和層析純化的抗體一般更受人們歡迎。
血清吸附處理：
經(jīng)過(guò)血清吸附過(guò)的二抗排除了與相關(guān)物種組織可能發(fā)生非特異性反應的免疫球蛋白，因此將二抗與樣本的非特異性結合降低到最低。如經(jīng)過(guò)人血清吸附過(guò)的二抗，在檢測過(guò)程中就不會(huì )與樣本中人的免疫球蛋白發(fā)生交叉反應。
西美杰代理的KPL品牌是專(zhuān)業(yè)親和純化二抗和底物顯色系統生產(chǎn)商，擁有40余年的產(chǎn)品研發(fā)經(jīng)驗，2013年被知名體外診斷試劑供應商SeraCare收購，深受廣大診斷企業(yè)好評。下表是KPL熱賣(mài)二抗推薦：
|
檢測物種 |
Unlabeled |
HRP |
AP |
FITC |
Cy3 |
Cy5 |
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兔 |
5210-0174 |
5220-0336 |
5220-0308 |
5230-0426 |
5230-0359 |
5230-0372 |
|
小鼠 |
5210-0185 |
5220-0341 |
5220-0310 |
5230-0427 |
5230-0364 |
5230-0376 |
|
人 |
5210-0158 |
5220-0330 |
5220-0303 |
5230-0288 |
5230-0355 |
5230-0370 |
|
大鼠 |
5210-0179 |
5220-0364 |
5220-0377 |
5230-0301 |
5230-0361 |
- |
|
山羊 |
5210-0170 |
5220-0362 |
5220-0384 |
5230-0294 |
5230-0358 |
5230-0371 |
|
雞 |
5210-0205 |
5220-0373 |
5220-0389 |
5230-0325 |
- |
5230-0379 |
|
狗 |
5210-0195 |
5220-0368 |
5220-0387 |
5230-0314 |
- |
- |
|
猴 |
5210-0216 |
5220-0333 |
- |
5230-0422 |
- |
- |
|
火雞 |
5210-0207 |
5220-0374 |
- |
5230-0327 |
- |
- |
|
馬 |
5210-0201 |
5220-0370 |
5220-0380 |
5230-0320 |
- |
- |
|
貓 |
5210-0198 |
5220-0369 |
5220-0379 |
5230-0317 |
- |
- |
|
綿羊 |
5210-0204 |
5220-0372 |
5220-0388 |
5230-0324 |
- |
5230-0378 |
|
牛 |
5210-0169 |
5220-0361 |
5220-0383 |
5230-0293 |
- |
- |
|
豚鼠 |
5210-0181 |
5220-0366 |
5220-0378 |
5230-0303 |
- |
- |
|
倉鼠 |
- |
5220-0371 |
- |
- |
- |
- |
|
雪貂 |
- |
- |
5220-0320 |
- |
- |
- |
|
豬 |
5210-0171 |
5220-0363 |
5220-0306 |
5230-0297 |
- |
- |
|
鴨 |
5210-0206 |
5220-0296 |
- |
5230-0326 |
- |
- |
|
鹿 |
5210-0209 |
5220-0298 |
- |
5230-0329 |
- |
- |
|
白足鼠 |
5210-0210 |
5220-0375 |
5220-0382 |
- |
- |
- |
|
鏈霉親和素 |
- |
5270-0029 |
5270-0030 |
5270-0028 |
5270-0022 |
5270-0023 |
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